徕卡显微镜干燥生物样品准备的显微分析

2016-04-11技术资料

X射线微型计算机断层扫描(micro-CT)是一种常规应用于非侵入性技术为生物体的内部解剖和形态的调查。作为micro-CT的结果扫描一叠的灰度图像由一系列在限定的角度时样品旋转采取突起产生的。自从几年基于实验室的micro-CT成像系统的数量不断增长使这种技术可用于研究和应用的广谱。

类似的如扫描电子显微镜等成像技术,micro-CT允许研究生物样品中几乎所有的条件(如鲜,干或防腐剂内)。micro-CT是理想的技术为研究骨骼,牙齿和贝壳在3D,但软组织的分析,显著影响,根据化合物与低原子序数元素的存在下通过其低的吸收对比度阻碍。为了克服此限制,几种方法可以应用于包括不同的染色和/或干燥技术以及相相关对比成像。但是,只要有可能样品应在干燥条件下进行分析,因为它提供一个显著更高的信噪比相比扫描在液体样品。 为了干燥细腻的生物样品,临界点干燥被校对是最 好的方法相比例如,化学或空气干燥,因为它保留了结构,同时尽量减少工件,如组织和失真的收缩。

书蝎子肌肉微型计算机断层扫描协议

介绍

种类:书蝎(Neobisium SP)。

书蝎与随后的X射线显微计算机断层摄影术(micro-CT)的临界点干燥来检测解剖特征,特别考虑到肌肉组织。 
 

步骤

样品架:样品转移到微多孔样品锅中,并置于滤盘和多孔盆保持器的腔室。 
 

固定和脱水

  • 乙醇(70%):过夜

  • 乙醇系列(80%,90%,96%,100%):2×10分钟。

  • 碘染色(在100%乙醇1%碘溶液):过夜

  • 乙醇(100%):2×10分钟。

 

CPD300自动程序

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安装和扫描

干燥样品胶合昆虫销和扫描用Xradia MicroXCT-200 X射线成像系统(卡尔蔡司X射线显微公司,普莱森顿,美国)。

徕卡显微镜干燥生物样品准备的显微分析

图1:一本书蝎子prosoma的容积重建(外视图和内视图以可视化的肌肉)。伊丽莎白礼貌和Lipke彼得·米哈利克博士,格赖夫斯瓦尔德,德国大学。 


昆虫的脑的微型计算机断层扫描协议

介绍

种类:吹飞(丝光绿恺撒)

吹的临界点干燥,随后的X射线显微计算机断层摄影术(micro-CT),飞来检测神经解剖学特征。 
 

步骤

样品支架:将样品分别放置在节肢动物保持器的腔室。 
 

固定和脱水

  • 布安固定液:隔夜

  • 0.1M磷酸盐缓冲液(1.8%蔗糖,pH值7.2):3×10分钟。

  • 乙醇系列(60%,70%,80%,90%,96%,100%):2×10分钟。

  • 碘染色(在100%乙醇1%碘溶液):过夜

  • 乙醇(100%):2×10分钟。 
     

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安装和扫描

干燥的样品被粘在昆虫销和扫描用Xradia MicroXCT-200 X射线成像系统(卡尔蔡司X射线显微公司,普莱森顿,美国)。

徕卡显微镜干燥生物样品准备的显微分析

图2:容积重建和击飞的头部和大脑的虚拟部分。伊丽莎白礼貌和Lipke彼得·米哈利克博士,格赖夫斯瓦尔德,德国大学。 


 

昆虫幼虫的微型计算机断层扫描协议

介绍

品种:红血虫(摇蚊幼虫)

蚊幼虫与随后的X射线显微计算机断层摄影术(micro-CT)的临界点干燥以重构内解剖结构。 
 

步骤

样品架:样品分别放置在节肢动物持有人的商会。(奥林巴斯显微镜)
 

固定和脱水

  • 2.5%戊二醛(于0.1M磷酸盐缓冲液):过夜

  • 0.1M磷酸盐缓冲液(1.8%蔗糖,pH值7.2):3×10分钟。

  • 乙醇系列(60%,70%,80%,90%,96%,100%):2×10分钟。

  • 碘染色(在100%乙醇1%碘溶液):过夜

  • 乙醇(100%):2×10分钟。 
     

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安装和扫描

干燥样品胶合昆虫销和扫描用Xradia MicroXCT-200 X射线成像系统(卡尔蔡司X射线显微公司,普莱森顿,美国)。

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图3:容积重建和红血虫呈现出多种器官系统的虚拟部分。伊丽莎白礼貌和Lipke彼得·米哈利克博士,格赖夫斯瓦尔德,德国大学。