尼康显微镜双频激发块FITC-Texas Red的应用介绍

紫外线和尼康FITC-Texas Red滤光片组合可见光透射光谱曲线下面示于图1.该过滤器组被设计用于将信号从异硫氰酸荧光素（FITC）和Texas Red在双标记实验中的探针Zui佳检测，并采用激发滤光器与窄带通窗口在蓝色（490-505nm），绿色（560-580nm）光谱区。 并入到单个元件中的双发射（阻挡）激发块的通带允许同时从两个荧光检测的绿色和红色发光。具有选择为互补的发射和激发波长的两个带通透射区域（多色）一个二色镜的透射和反射带的每一个过滤器，和应用程序之间的尖锐过渡，允许双波段信号检测以Zui小的干扰。

双激发激发块模块FITC-Texas Red规格：

• 激发波长筛选：490-505nm（带通，498 CWL）和560-580nm（带通，570 CWL）

• 多色镜波长：510-555nm（带通）和585-665nm（带通）

• 屏障过滤波长：515-545nm（带通，530 CWL）和600-650nm（带通，625 CWL）

在FITC-Texas Red双激发带的荧光滤光器组合是用于同时检测的荧光染料FITC-Texas Red与带之间的Zui小串扰的专门设计的，并且可以与其他对具有相似光谱分布的荧光探针的使用。过滤器设置的较短波长信道将选择狭义的光谱区域为蓝色激发和绿色发光检测，而较长的波长成分对应绿色激发和红光发射检测。 研究以下荧光团的各种组合时FITC-Texas Red激发块组建议：FITC，绿色荧光蛋白（GFP），的Cy2，BODIPY FL，Oregon Green，或的Alexa Fluor 488（蓝色激发），配对Texas Red或Alexa Fluor 594（绿色激发）。 在图2中呈现的图像表明具有多种针对不同细胞内位置的荧光探针对这个激发块组合的性能。

示于图2（a）是从的Madin-Darby犬肾（MDCK线）染色的细胞与MitoTracker红CMXRos和Alexa Fluor 488鬼笔环肽，其靶向细胞内的线粒体的网络和细胞骨架的肌动蛋白丝，分别培养的荧光发射。 Zui大吸收MitoTracker RED CMXRos的是579nm，并且Zui大发射发生在599nm，而为的Alexa Fluor 488中的相应值是498和519nm。 另外，将试样同时用DAPI染色（在细胞核靶向DNA;蓝色发光）。 注意没有来自蓝色（DAPI）荧光信号，但明亮的橙红色荧光被管状线粒体，并从在细胞质肌动蛋白丝的绿色发射表现。

绵羊表皮皮肤组织的一个薄的部分染色DNA和糖蛋白与SYTOX Orange和Oregon Green488麦胚凝集素，分别示于图2（b）。 Zui大吸收SYTOX橙是547nm，并且Zui大发射发生在570nm，而对于Oregon Green488中的相应值是496和524nm。 另外，将试样同时染色的Alexa Fluor 350缀合至鬼笔环肽（靶向肌动蛋白网络;蓝色发光）。 注意没有信号从蓝色（的Alexa Fluor 350）的荧光团，但明亮的橙红色荧光由核和从毛囊的细胞质和膜元件的糖蛋白的绿色发射表现。（奥林巴斯显微镜）

在印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 568缀合的鬼笔环肽和LysoTracker绿DND-26成纤维细胞，其靶向细胞内的肌动蛋白和溶酶体的培养荧光发射，分别被显示在图2的（c）。 Zui大吸收的Alexa Fluor 568的是578nm，并且Zui大发射发生在603nm，而对于LysoTracker绿DND-26的相应的值是501和511nm。 另外，将试样同时用DAPI染色（靶向DNA在细胞核中;激发在358nm，并且发射在461nm）。 注意没有来自蓝色荧光团（DAPI）的信号，但明亮的绿色和桔红色荧光通过在细胞骨架网络的溶酶体和肌动蛋白丝表现出的存在。

图2（D）展示了从海拉癌细胞转染的EGFP-过氧化物酶体靶向信号1（PTS1）的融合蛋白，并用的Alexa Fluor 546鬼笔环肽的培养的荧光发射。 这些荧光探针靶向过氧化物酶体和细胞骨架肌动蛋白丝的网络，分别。 Zui大吸收的EGFP-PTS1嵌合体是488nm，并且Zui大发射发生在507nm，而对于将Alexa Fluor 546的相应的值是556和573nm。 另外，将试样同时用Hoechst 33258（靶向于细胞核中的DNA;蓝色发光）。 注意没有来自蓝色荧光信号，但明亮的橙红色荧光的细胞骨架肌动蛋白丝，并从在细胞质中过氧化物酶体的强烈绿色发射表现。

兔肺组织染色的肌动蛋白丝和糖蛋白的Alexa Fluor 546鬼笔环肽和Oregon Green488麦胚凝集素的薄膜部，分别示于图2（e）所示。 Zui大吸收的Alexa Fluor 546的是556nm，并且Zui大发射发生在573nm，而对于Oregon Green488中的相应值是496和524nm。 另外，将试样同时用DAPI染色（在细胞核靶向DNA;蓝色发光）。 注意没有来自蓝色荧光信号，但明亮的橙红色荧光丝状肌动蛋白，并从在组织切片的细胞质和膜糖蛋白成分的绿色发光发挥。

由薄苜蓿的部分自发荧光发射强度（ 紫花苜蓿 ）的根组织中演示了图2（f）所示。 在植物组织中的内源性的自发荧光产生于各种生物分子，包括木质素，叶绿素，β-胡萝卜素，叶黄素和。 在蓝色和绿色的激发区域，叶绿素具有吸收带，具有高消光系数，并产生一个显著量荧光在与450和550nm之间的波长激发。 对于以上说明的苜蓿根组织，注意自发荧光发射强度中的绿色和红色光谱区域的存在，这是尼康FITC-Texas Red荧光激发块组合的特性。